NIBSC 06/206 人HPV18型标准品用于核酸检测的第一个 HPV 18 型 (HPV18) DNA 国际标准由冷冻干燥的重组质粒 pBR322 含有通过其特别的 EcoR1 位点克隆的全长 HPV18 DNA (Quint et al., 2006)。 EcoR1 克隆位点位于 E1 基因内。该标准已在纯化的人类基因组 DNA 的背景下配制,以 0.5 ml 等分试样冻干并在 -20 °C 下储存。
单位:
HPV18 DNA 的第一个国际标准(NIBSC 代码 06/206)已被规定为每安瓿 5 x 10^6 国际单位 (IU) 的单位。
可追溯性声明:
它是在 2008 年 1 月的 WHO 会议上提出的(Ferguson 等人,
2009) HPV18 DNA 国际标准的使用说明包括用于确定用于制定国际标准的散装材料的理论 HPV18 基因组当量 (GEq) 的计算和假设,从而证明 1 IU 相当于 1 HPV18 DNA 的 GEq。因此,第一个 WHO HPV18 DNA 国际标准的最终统一仍然是 IU,而可追溯性声明将允许用户将 IU 等同于 GEq。
材料的使用:NIBSC 06/206 人HPV18型标准品在重新配制之前,不应尝试称量冻干材料的任何部分。
HPV18 DNA 的第一个国际标准包含高拷贝数模板。 HPV18质粒的风险很高,打开玻璃安瓿时通过雾化造成 DNA 污染。材料必须在单独的实验室环境中打开和处理,远离试剂、实验室器具和样品等其他预放大组件。
NIBSC 06/206 人HPV18型标准品材料以冻干形式提供,使用前应在 0.5 ml 无菌无核酸酶水中复溶。确保安瓿的内表面被添加的水润湿,以便重组粘附在玻璃上的任何冻干材料颗粒。
重组材料的最终浓度为 1 X 10^7 IU/mL。重组材料适用于校准内部或工作标准,用于扩增和检测 HPV18 DNA(WHO/IVB/10.12)。NIBSC 06/206 人HPV18型材料不应用于校准或评估提取、沉淀或离心程序。 NIBSC 可以为在提取步骤无法与扩增步骤分离的分析中使用 06/206 提供指导(例如进样、应答平台)。该材料尚未针对人类 DNA 核酸扩增技术进行校准。
配置:生物材料原产国:英国。每个安瓿含有 0.5 ml HPV18 质粒 DNA 的冻干当量,稀释在 10 mM Tris 缓冲液 pH7.4 中,含有 1 mM EDTA、5 mg/ml 海藻糖和约 1 x 106 人 Geq/ml C33a 细胞。
存储:收到时,NIBSC 06/206 安瓿瓶应存放在 -20 °C 或以下。请注意:由于冻干材料固有的稳定性,NIBSC 可能会在环境温度下运输这些材料。