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ERM-AD623 BCR-ABL pDNA校准标准品旨在用于定量实时聚合酶链反应(qPCR)分析的校准,测量白血病患者cDNA样本中的BCR-ABL1b3a2转录水平。
ERM-AD623ERM-AD623旨在用于qPCR检测,定量BCR-ABL1b3a2转录本与3个对照基因(CG)中的1个转录本相关:ABL1、BCR或葡萄糖醛酸酶(GUSB)。可以使用几种使用不同的探针/引物集或PCR仪器的qPCR检测方法(见认证报告[1]的附录H)。ERM-AD623对BCR-ABL1b2a2转录本的定量的适用性必须由实验室来验证。ERM-AD623可直接用于cDNA样本的常规分析,也可间接用于校准内部质粒标准品。
材料描述
融合基因BCR-ABL1是连接两个基因(c-abl致癌基因1[ABL1]和断点簇基因[BCR])的基因易位的结果,是慢性髓系白血病(CML)的主要原因。断点可以发生在基因内的不同位置,两个主要转录本称为b2a2和b3a2(将BCR的第13和第14外显子分别与ABL1的第2外显子连接)。BCR-ABL编码一种构成型活性酪氨酸激酶,它是用酪氨酸激酶抑制剂标准治疗CML的靶向药物。定期监测患者外周血中BCR-ABL1转录水平对于评估[2]的治疗疗效至关重要。采用由RNA提取、逆转录和qPCR组成的多步测量程序,如图1所示,用于定量血液样本中的BCR-ABL转录水平。
材料处理
6个ERM-AD623 BCR-ABL pDNA校准标准品质粒溶液在使用前应保存在-20°C下。为了准备可使用的溶液,小瓶的内容物应该*解冻,并通过翻转小瓶几次轻轻混合。一旦解冻,溶液最多可在4°C下保存4周,或放在-20°C下。但是,这些溶液不应通过超过10次的冻融循环。
质粒溶液的认证值及其相关的不确定度只有在遵守2µL证书上规定的最小样品摄入量时才有效。ERM-AD623不能用于样本摄入量较低的BCR-ABL转录本的可靠定量。特别是对于拷贝数浓度最.低的质粒溶液(即ERM-AD623f)的测量结果,在2µL以下的样品摄入量下观察到泊松分布。关于qPCR测量的质量标准的建议已发表于[5],并总结在表1中。